淺談HPV的分型檢測

【摘要】宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，它是迄今為止唯一找出治病原因的癌癥。人乳頭瘤病毒（human papillomavirus HPV）的感染是宮頸癌發(fā)病的必要條件，99.8%的宮頸癌患者中可以檢測到生殖道HPV病毒的感染。高危型人乳頭瘤病毒的持續(xù)感染是導(dǎo)致宮頸癌前病變的及宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的主要因素。

【關(guān)鍵詞】人乳頭瘤病毒；宮頸癌；高危型

宮頸癌在女性腫瘤的發(fā)生率位居第二，是女性健康的“第二殺手”。據(jù)統(tǒng)計，我國每年新增宮頸癌病例約13.5萬。HPV感染在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中起到重要的作用。因此，HPV的篩查及高危型HPV的檢測對降低宮頸癌前病變及宮頸癌的發(fā)生率十分重要。

一、HPV的結(jié)構(gòu)與分型

 HPV是小環(huán)狀雙鏈DNA病毒，在自然界中以裸核休眠狀態(tài)存在，即便在無宿主的寒冷條件下HPV也能獨立存活數(shù)月，是人類目前所知道的唯一的病毒宿主。HPV為高特殊種群選擇病毒，具有強烈嗜上皮性、高度組織和宿主特異性，可致人類皮膚及黏膜異常增生。基因組分為早期區(qū)（E區(qū)）、晚期區(qū)（L區(qū)）和長調(diào)控區(qū)（LCR）三個功能區(qū)。

HPV不能通過免疫學(xué)方法進行血清分型，主要通過HPV L1區(qū)的DNA雜交及酶譜分析的方法，將DNA同源性小于50%的HPV定義為新亞型。目前已經(jīng)確認的亞型有100余種，至少有42種能感染人類生殖道上皮細胞。HPV6、11、40、42、43、44、54、61、72和81等型別被認為是低危型，與宮頸大部分良性病變有關(guān)；HPV16、18、31、35、39、45、51、52、56、58、59、,68、78和82等型別被認為是高危型，與宮頸癌關(guān)系密切。其中HPV16和HPV18型是最常見的高危型HPV。HPV16型多見于宮頸鱗癌，而HPV18型則多見于宮頸腺癌。

二、HPV的感染率和年齡的關(guān)系

HPV感染通常是沒有癥狀的，它是世界上第一大傳染疾病。全世界每年有約10－15%的新發(fā)病例。HPV的感染因素包括初次性生活的年齡、性伴侶數(shù)、吸煙、長期口服避孕藥、免疫缺陷和抑制等。年齡是影響HPV感染率最重要的因素之一。HPV感染率隨年齡分布呈V形，感染率最低的年齡組為30-34歲，兩個高峰分別為20-24歲和40-49歲年齡組。60%以上機體在6個月左右能依靠自身免疫機制逐漸將HPV感染清除；當病毒或宿主的基因發(fā)生突變或宿主的防御機制發(fā)生缺陷時，則可誘導(dǎo)HPV-DNA片段整合到宿主細胞的DNA上，使得相應(yīng)基因調(diào)控失調(diào)，30%以上會發(fā)展成宮頸癌。

三、HPV分型的檢測方法

過去，因缺少高靈敏度和特異性的HPV診斷試劑，大約70%的感染者在最初的兩年是無法檢測到HPV的。大部分感染了HPV的婦女將會發(fā)展為輕度宮頸損傷，約15%的HPV感染者將會在兩年內(nèi)發(fā)展為重度損傷，而重度宮頸損傷極有可能發(fā)展為惡性癌變。

傳統(tǒng)上，宮頸涂片檢測是群體篩查的常規(guī)手段，屬于細胞學(xué)檢測方法。此方法以觀察作為診斷基礎(chǔ)，受取材、涂片制作質(zhì)量、閱片技術(shù)影響，其準確率低，假陰性高，重復(fù)性差，漏診率可達30%。在檢查和篩選HPV的基因型方法中，實時熒光PCR法及雜交捕獲法最為常用，但是實時熒光PCR法所需要的設(shè)備比較昂貴，且操作繁瑣，不適合于對子宮頸癌的大規(guī)模篩查。雜交捕獲法試劑盒無須PCR擴增即可檢測出臨床樣品中的HPV DNA，并且可區(qū)別高危型和低危型兩類，但是此類試劑盒無法鑒定出感染HPV的具體基因型。

PCR實驗室又叫基因擴增實驗室。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）是一種先進的基因檢測技術(shù)，具有高度敏感性、特異性、快速、簡便等特點。通過對病變組織或可疑部位樣品提取DNA，利用特異引物對目標DNA進行擴增。當某種病原微生物含量極少時，傳統(tǒng)的檢測方法難以檢出，但通過PCR技術(shù)可將DNA片斷擴增到百萬倍以上，能精確檢測出病毒在患者體內(nèi)存在的數(shù)量、是否復(fù)制、是否傳染、傳染性有多強，及時判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物，判斷藥物療效如何，有利于各種感染性疾病的病原學(xué)診斷，從而為臨床治療提供可靠的檢驗依據(jù)。

我院檢驗科PCR實驗室于2016年8月購進了獲得美國專利技術(shù)的Hybribio雜交儀和SLAN-96S擴增分析儀，正式啟動HPV分型檢測項目，利用熒光PCR方法進行21分型和12+2分型檢測。標本為宮頸分泌物（女性）和尿道分泌物（男性）。由于標本量較多，檢驗科指派三名專業(yè)技術(shù)人員每天進行HPV分型檢測，為廣大患者提供準確及時的檢驗服務(wù)，也熱忱歡迎各位的咨詢和指導(dǎo)。咨詢電話：0891-6928269。